Длительность генерации антителообразующей клетки. Формирование АОК

Обновлено: 21.05.2024

Основной принцип метода локального гемолиза состоит в том, что определенное число клеток лимфоидных тканей (селезенка, лимфатические узлы) мышей, иммунизированных эритроцитами барана, смешивают in vitro с эритроцитами барана и расплавленным, но не влияющим на жизнеспособность клеток агаром. Смесь помещают на чашку Петри и после инкубации при 37 °С в присутствии комплемента визуально подсчитывают число зон гемолиза («бляшек») в агаровой пластинке. В центре каждой «бляшки» находится АОК, представляющая собой плазматическую или лимфобластную клетку. Зная взятое для посева на агар число лимфоидных клеток, можно высчитать количество АОК на фиксированное число кариоцитов (например, на 1 млн или 10 млн) или на целый орган (селезенка).

Прямой способ (принцип описан выше) выявляет АОК, продуцирующие IgM антитела, лизирующие эритроциты в присутствии комплемента.

С помощью непрямого способа (рис. 3.6, см. также цв. вклейку) представляется возможность выявить АОК, продуцирующие IgG антитела (АТ). Для этих целей суспензию клеток дополнительно обрабатывают кроличьей антисывороткой, содержащей АТ против IgG мышей, на пике выработки IgM-АТ. Антисыворотка, содержа-

щая IgM-АТ против IgG мышей, взаимодействует in vitro в агаре с IgG-АТ против эритроцитов барана с присоединением комплемента. Этот комплекс способен лизировать эритроциты. Таким образом, при непрямом методе выявляется сумма АОК, продуцирующих IgM и IgG антитела.

Рис. 3.6.Непрямой метод Йерне: а - схема постановки метода; б - зона гемолиза, в центре АОК

Использование эритроцитов барана, конъюгированных с растворимыми антигенами, дает возможность изучить динамику образования АОК к некорпускулярным антигенам. Метод локального гемолиза в модификации может быть применен для анализа АОК у разных видов животных, а также у человека.

Впервые метод Н. Йерне позволил выявить количественныезакономерности динамики антителообразования при первичной и вторичной иммунизации животных. Перечислим указанные закономерности.

1. При первичной иммунизации мышей эритроцитами барана вначале возрастает число АОК, продуцирующих IgM-АТ (пик образования АОК в среднем у мышей - 4-5 сут), а затем, через 1-2 дня, увеличивается число АОК, продуцирующих IgG-АТ.

2. При вторичной иммунизации иммунный ответ осуществляется преимущественно за счет АОК, вырабатывающих IgG.

3. После иммунизации число АОК возрастает за несколько дней до 50-500 млн клеток. Накопление АОК в лимфоидной ткани предшествует выявлению циркулирующих в крови АТ.

4. В небольшом количестве (1 на 10 млн кариоцитов) АОК предсуществуют в лимфоидных тканях (фоновые АОК).

5. Нарастание числа АОК после иммунизации происходит постепенно, по кривой, близкой к экспоненциальной, т.е. в результате размножения изначально небольшого числа клеток-предшественников.

6. АОК после иммунизации выявляются в основном в селезенке, лимфатических узлах, в костном мозгу и отсутствуют в других тканях (печень, легкие, почки, мозг).

Длительность генерации антителообразующей клетки. Формирование АОК

Жесткое подавление V-генов. Мультипотентность клеток синтезирующие антитела

На более жесткое фенотипическое ограничение VH-генов по сравнению с ограничением экспрессии Сн-генов указывает то, что в сыворотках некоторых больных обнаружены миеломные белки, различающиеся по константным областям, но сходные по вариабельным. Так, в сыворотке одного больного присутствовало два моноклональных белка, относящихся к разным классам (IgA и IgM), но очень сходных по идиотипу.

Иммунофлуоресцентный анализ лимфоцитов, извлеченных из костного мозга этого больного, показал, что изучаемые белки образуются в разных клетках. По-видимому, клоны обоих типов клеток возникли из одной зародышевой клетки, у потомков которой ограничение проявления Сн-генов менее жестко, чем Vн-генов (Silverman е. а., 1973).

Другой подход к выяснению вопроса о фенотипическом ограничении действия Vн-генов основан на изучении возможности синтеза одним В-лимфоцитом нескольких различающихся по специфичности антител.

Согласно данным большинства исследователей, подавляющая часть АОК образует антитела лишь одной специфичности. Клетки, образующие одновременно два антитела, либо отсутствуют, либо присутствуют в ничтожном количестве. Так, у мышей, иммунизированных двумя видами эритроцитов, антитела против обоих эритроцитов не образовывала ни одна из 16 904 изученных АОК.

Не удалось выявить двойных продуцентов ни в одном случае при изучении 27 845 АОК из лимфатических узлов кроликов, иммунизированных одновременно двумя гаптенами (Gershon е. а., 1968). Сходные результаты при иммунизации животных смесью разных антигенов получили и другие исследователи.

Лишь недавно появились две группы хорошо аргументированных опытов, указывающих на мультипотентность клеток, синтезирующих антитела. В качестве примера подобных опытов можно указать на работу, в которой in vitro суспензию клеток селезенок мышей иммунизировали комплексом эритроцитов с гаптеном (ТНФ — эритроциты барана). При этом образовывалось три типа АОК: 1) синтезирующие антиэритроциты барана, 2) синтезирующие анти-ТНФ и 3) синтезирующие антитела обоих типов.

Число двойных продуцентов было невелико (в 50—100 раз меньше, чем число АОК, образующих одно антитело). Однако наличие 2—30 двойных продуцентов на 1*106 клеток селезенки не вызывало сомнения. Отдельные АОК переносили в микрокультуры и определяли специфичность антител, образуемых как ими самими, так и их потомками. Оказалось, что часть дочерних клеток продолжала образовывать антитела той же специфичности, что и материнские. В противоположность этому специфичность многих дочерних клеток отличалась от исходной: потомки двойных продуцентов синтезировали лишь одно антитело, потомки клеток, синтезировавших антиэритроциты барана, начали синтезировать анти-ТНФ, и наоборот

Авторы второй группы работ обнаружили в селезенках мышей, иммунизированных двумя неродственными антигенами, клетки, образующие антитела против обоих антигенов (например, против эритроцитов барана и эритроцитов свиньи, или эритроцитов барана и эритроцитов лошади) . Помещенные в микрокультуры потомки АОК таких животных в некоторых случаях изменяли специфичность синтезируемых антител. Такое изменение наблюдалось у 10 из 911 изученных дочерних клеток.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Результаты активации В-лимфоцитов. Изменения В-клеток после активации

Результаты активации зависят исключительно от того, какие клетки способны в это время к активации, и от уровня дифференцировки клеток. Имеют значение частота митозов и продолжительность митотического цикла, уровень секреции антител и их класс, а также многое другое. Хотя иммуноглобулиновые рецепторы В-клеток и не участвуют прямо в генерации активирующего сигнала, они ответственны за специфичность иммунной реакции: избирательное присоединение к определенным В-клеткам антигена, содержащего в своей молекуле неспецифические митогенные детерминанты, способствует избирательной полиферации этих клеток.

Первым следствием действия антигена на В-клетки является перемещение иммуноглобулиновых рецепторов на их поверхности. В результате такого перемещения иммуноглобулиновые рецепторы, рассеянные более или менее равномерно на поверхности клеток, агрегируются, образуя «колпачки», или скопления (Vitteta, Uhr, 1975). Вслед за этим начинаются морфологические изменения (Фриденштейн, Чертков, 1969; Вернет, 1971).

Необходимо, однако, учитывать, что эти изменения, очевидно, не связаны прямо со способностью клеток образовывать антитела. Использование световой и сканирующей электронной микроскопии для изучения морфологии АОК, выявляемых методом локального гемолиза, показало, что антитело могут образовывать В-лимфоциты самой различной формы.

Так, например, через четыре дня после иммунизации мышей BALB/c эритроцитами барана в их селезенке было найдено восемь различающихся по морфологии типов АОК: плазмобласты (3%), плазматические клетки (10%), малые лимфоциты (38%), средние лимфоциты (16%), большие лимфоциты (9%), лимфобласты (10%), клетки с эксцентрическими темными или сегментированными ядрами (9%) и, наконец, двухъядерные клетки (5%). Наиболее активно синтезировали антитела двухъядерные клетки.

Активация лимфатических клеток приводит к изменениям буквально всех звеньев биохимического обмена в этих клетках. В первую очередь изменяется транспорт ионов (К+, Na+, Ca++), аминокислот, углеводов и нуклеозидов через поверхностную мембрану лимфатических клеток. В мембране изменяется обмен белков, липидов и углеводов (Wedner, Parker, 1976), уменьшается число конечных остатков сиаловой кислоты (Anteunis, 1974), и, наоборот, резко увеличивается (в 11 раз) число молекул трансплантационных антигенов (McCune е. а., 1975). Имеется много литературных данных по изменению обмена белков, углеводов, РНК и ДНК в цитоплазме и ядре лимфатических клеток после их активации (например, Wedner, Parker, 1976).

В последние годы особое значение придают происходящим при активации изменениям обмена циклических 3',5'-нуклеозид монофосфатов: циклического 3'-,5'-аденозинмонофосфата (цАМФ) и циклического 3'-,5'-гаунозинмонофосфата (цГМФ). Эти соединения регулируют многие биохимические процессы путем активации различных протеинкиназ.

Во многих случаях цАМФ и цГМФ выступают как антагонисты. Они привлекли внимание исследователей, изучающих активацию В-лимфоцитов, по двум причинам. Во-первых, ряд фактов указывает на то, что они (в первую очередь цАМФ) играют важную роль в регуляции клеточного деления. Во-вторых, оказалось, что через систему циклических 3',5'-нуклеозидмонофосфатов можно оказать глубокое влияние на внутриклеточный обмен без проникновения внутрь клетки, воздействуя на ее рецепторы. В частности, таким образом действуют многие гормоны.

Активация В-клеток приводит к превращению предшественников АОК в антителообразующие клетки и к началу их пролиферации. Прежде всего необходимо остановиться на вопросе о продолжительности генерации АОК. Она определялась несколькими методами:
1) по доле делящихся АОК, содержащих метку через различные промежутки времени после добавления радиоактивного тимидина;

2) по зависимости между интенсивностью гибели АОК и продолжительностью действия на них ядов, влияющих на клетки лишь в определенные стадии митотического цикла (например, оксимочевины, действующей в S-фазу).

Согласно мнению большинства исследователей, время генерации АОК как у мышей, так и у кроликов колеблется от 8 до 13 час, а продолжительность S-фазы — от 5 до 8 час.

Были сделаны попытки проследить изменение интенсивности синтеза антител и иммуноглобулинов на разных стадиях клеточного цикла лимфатических клеток. По-видимому, все исследователи наблюдали уменьшение синтеза иммуноглобулинов во время митоза. Данные об изменении интенсивности синтеза на разных стадиях цикла противоречивы.

Одни исследователи наблюдали быстрое увеличение в несколько раз синтеза антител и иммуноглобулинов в течение Gj-фазы и первой половины S-фазы, затем снижение этих процессов (Takahashi е. а., 1969; Cowan, Milstein, 1972; Thomas, 1974; Thomas e. a., 1975).

Другие же исследователи указывают на относительное постоянство синтеза иммуноглобулинов в течение межмитотического периода (Liberti, Bagliony, 1973). Возможно, что противоречия связаны с тем, что синтез иммуноглобулинов, их внутриклеточное накопление и их секреция изменяются на протяжении митотического цикла несинхронно (Byers, Kjdson, 1970).

Митотический цикл В-лимфоцитов сопровождается и другими периодическими изменениями. Например, уровень цАМФ и активность аденилциклазы в G,- и 02-фазах повышается, а в М-фазе снижается (Millis е. а., 1974).

Принципиальное значение имеет вопрос о том, связаны ли с делением превращения клеток-предшественников, не образующих антитела, в клетки, их образующие, и обусловлено ли последующее нарастание числа АОК только делением клеток, уже образующих антитела. Согласно мнению большинства исследователей, оба эти процесса связаны с делением клеток. В пользу этого мнения говорят следующие факты. Если одновременно с антигеном ввести радиоактивный тимидин, то в ядрах всех образовавшихся после иммунизации АОК обнаруживается радиоактивная метка (Hunig е. а., 1974). Ингибиторы митоза тормозят индукцию и развитие антителообразования. Добавленный к культурам радиоактивный тимидин с высокой удельной активностью накапливается в ядрах пролиферирующих клеток и убивает их, при этом прекращается нарастание числа АОК.

Наряду с этим имеются и данные, убедительно указывающие на возможность (по крайней мере при некоторых условиях) превращения без деления клеток, не образующих антитела, в клетки, их образующие. Так, в некоторых случаях иммунизация вызывает столь быстрое появление АОК или увеличение их числа, что это трудно объяснить делением. При действии некоторых митогенов на суспензию клеток селезенки число АОК может за 1 час увеличиться почти в 2 раза (Rich, Pierce, 1973).

Время удвоения числа АОК в клеточных культурах иногда составляло всего лишь 3,4 часа (Fidler, 1975) или 4,0 часа (Dutton, Mishell, 1967). Между тем, как мы видели выше, продолжительность митотического цикла АОК, определенная различными методами, была не меньше 8—13 час. Культивирование перитонеальных клеток с антигеном приводило к появлению АОК даже в том случае, когда в среде присутствовали ингибиторы митоза (например, колхицин) (Bussard, 1969).

На то, что нарастание числа АОК после иммунизации не связано с размножением одного клона АОК, образовавшегося при индукции антителообразования, указывают опыты в полиакриламидных камерах. В таких камерах клетки суспензии селезенки мыши разделены на отдельные группы (фокусы). Оказалось, что суммарное увеличение числа АОК происходило не только за счет размножения АОК в фокусах, где они уже присутствуют, а также за счет появления АОК в новых фокусах, ранее их не содержавших (Marbrook, Haskill, 1974).

На основании этих и некоторых других фактов ряд исследователей склонен признать, что увеличение числа АОК (во всяком случае при некоторых условиях), может быть связано с двумя процессами: делением клеток, образующих данное антитело, и переходом к антителообразованию клеток, которые ранее антител не образовывали (процесс вовлечения в антителообразование).

- Вернуться в оглавление раздела "Физиология человека."

Щитовидная железа в процессе своего функционирования вырабатывает различные гормоны. Тироксин- один из самых важных ее гормонов, который влияет на огромное количество процессов жизнедеятельности организма. Тиреоидные гормоны, участвую в самых разнообразных физиологических и клеточных процессах, включая рост, развитие и обмен веществ в целом. Основные эффекты тиреоидных гормонов реализуются на уровне генома, хотя тироксин дейтсвует и вне его – на плазматическую мембрану клетки, цитоплазму, митохондрии и т.д. Этот гормон оказывает более длительное действие чем многие другие гормоны поэтому поддержание его постоянного уровня имеет жизненно важное значение для организма. В данной статье представлен обзор литературных данных о влиянии тироксина на адаптивный и врожденный иммунитет, на антителогенез, а также на реакцию гиперчувствительности замедленного типа.

1. Годовалов А.П. Адренергическая регуляция фагоцитарной активности нейтрофилов при экспериментальном тиреотоксикозе // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2010. – № 2-1. – С. 112.

2. Годовалов А.П., Зенков А.Л. Характеристика клеточноопосредованного иммунного ответа, антителообразования, количественного состава и фагоцитарной активности перитонеальных клеток крыс при экспериментальном тиреотоксикозе разной тяжести // Вестник Уральской медицинской академической науки – 2014. – № 3 – С. 22-23.

3. Годовалов А.П., Шилов Ю.И. Влияние адренергических соединений на иммунный ответ при экспериментальном тиреотоксикозе // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2009. – № 2-1. – С. 90.

4. Годовалов А.П., Шилов Ю.И. Влияние агониста бета-адренорецепторов гексопреналина сульфата на иммунный ответ в условиях экспериментального гипертиреоза // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2006. – № 3-1. – С. 40.

6. Шилов Ю.И., Годовалов А.П. Влияние тироксина и клонидина гидрохлорида на пролиферативный ответ лимфоцитов и продукцию иммуноглобулинов в системе in vitro // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2012. – № 4 (41). – С. 73-74.

7. Шилов Ю.И., Годовалов А.П. Влияние агониста и антагониста бета-адренорецепторов на кислород-зависимую микробицидную активность нейтрофилов периферической крови в нст-тесте при экспериментальном тиреотоксикозе // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2011. – № 2-1 (35). – С. 79-80.

8. Шилов Д.Ю., Годовалов А.П., Шилов Ю.И., Юркова Е.В. Влияние агониста бета-адренорецепторов гексопреналина сульфата на пролиферативный ответ лимфоцитов и продукцию иммуноглобулинов в присутствии тироксина и дексаметазона фосфата in vitro // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 6. – С. 192-196.

9. Шилов Ю.И., Годовалов А.П. Участие бета-адренергических рецепторов в регуляции иммунного ответа при экспериментальном тиреотоксикозе // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. – 2010. – Т. 8, № 1. – С. 79.

10. Шилов Ю.И., Годовалов А.П. Иммуномодулирующее действие адренергических соединений в условиях экспериментального тиреотоксикоза // Российский иммунологический журнал. – 2008. – Т. 2, № 2-3. – С. 153.

Известно, что иммунная система человека находится под контролем нейроэндокринной регуляции, среди элементов которой одно из ведущих мест занимают гормоны щитовидной железы.

В экспериментах in vivo и in vitro установлено, что трийодтиронин и тироксин Т4 способны изменять реакции как адаптивного, так и врожденного иммунитета. Показано их стимулирующее действие на антителогенез и реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Установлено непосредственное участие Т4 в контроле процессов антигеннезависимого и антигензависимого этапов созревания иммунокомпетентных клеток при гуморальном иммунном ответе и определена зависимость данных эффектов от дозы гормона.

В немногочисленных работах, посвященных анализу влияния тиреоидных гормонов на функции фагоцитирующих клеток, выявлена не только стимуляция поглотительной активности интактных лейкоцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов, но и ее угнетение для этих клеток. Комплексный анализ эффектов экзогенного T4 на уровне одного и того же организма с одновременной регистрацией реакций врожденного и адаптивного иммунитета не проводился.

Цель работы - изучение влияния экзогенного тироксина на гуморальный и клеточноопосредованныи иммунный ответ при различных вариантах иммунизации, с одновременной оценкой поглотительной активности клеток крови и перитонеальных макрофагов.

1. Молекулярные аспекты внутриядерного действия трийодтиронина и тироксина

Щитовидная железа секретирует несколько форм тиреоидных гормонов - Т4, трийодтиронин Т3 и обратный трийодотиронин (рТ3). Из общего пула Т4, секретируемого щитовидной железой, от 30 до 40% превращается путем монодейодирования в Т3, а 40% - в рТ3, что составляет 80% тканевой популяции первого и 95% популяции второго[2]. Попав в кровь, Т3 и Т4 разносятся по организму в основном в связанном с белками плазмы виде. Т4 обладает высоким сродством к глобулину (тироксин или тиронинсвязывающий глобулин, ТСГ). Т4 связывается и с преальбумином (тироксинсвязывающий преальбумин (ТСПА) или транстиретин) и в небольших количествах с альбуминовой фракцией плазмы. Из общего количества Т4 в крови 75% связано с ТСГ, 15-20% - с ТСПА и менее 0,05% остаются в свободном состоянии. Связанные и свободные формы гормонов находятся в динамическом равновесии. Любое снижение концентрации свободного гормона в крови ведет к уменьшению связывания, и наоборот [3].

Способностью проникать в клетки, взаимодействовать со специфическими рецепторами и вызывать биологические эффекты обладают лишь свободные гормоны (не связанные с белками плазмы). Несмотря на значительные различия в общем количестве гормонов, свободная фракция Т3 близка к таковой Т4, однако время полужизни Т4 в плазме в 4-5 раз больше, чем Т3.

Тиреоидные гормоны играют важную роль в регуляции разнообразных физиологических и клеточных функций, включая рост, развитие и обмен веществ в целом. Основные эффекты тиреоидных гормонов реализуются на уровне генома, хотя эти гормоны действуют и вне его - на плазматическую мембрану клетки, цитоплазму, митохондрии и т.д.

Свободные Т3 и Т4 относительно легко проникают из крови в клетки путем пассивной диффузии, либо взаимодействуют сначала с рецептором на плазматической мембране, где комплексируются с белками, образуя внутриклеточный пул тиреоидных гормонов. Перенос Т3 и Т4 в клетки зависит от доступности АТФ и внеклеточной концентрации Na+. Кроме того, внутриклеточные эффекты тиреоидных гормонов тесно связаны с процессами их деиодирования. Т4 может подвергаться дейодированию в различные соединения, сохраняющие йод в своей структуре, пока не превратится в полностью лишенный йода тиронин. Самым важным из таких превращений в тканях является конверсия Т4 в более активный Т3 под действием 5-дейодиназ, причем Т3 и Т4 подвергаются дальнейшей внутриклеточной инактивации [7] .

Попав в клетку, тиреоидные гормоны проникают в ядро, где с высоким сродством и специфичностью связываются с ядерными рецепторами тиреоидных гормонов. Поскольку сродство ядерных рецепторов к Т3 примерно в 9 раз выше, чем к Т4, принято считать, что эффекты воздействия тиреоидных гормонов реализуются через Т3. Однако и сам Т4 способен вызывать ряд эффектов, обладая, по-видимому, собственными рецепторами в некоторых клетках-мишенях. Так, на мембранах эритроцитов человека были обнаружены связывающие сайты для Т4 [5] .

Следовательно, при формировании гуморальной и клеточной составляющих первичного иммунного ответа введение Т4 на антигеннезависимом этапе иммуногенеза дозозависимо стимулирует реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Инъекции гормона на протяжении антигензависимого этапа отменяют этот эффект. Введение Т4 до и после иммунизации восстанавливает стимулирующий эффект гормона на формирование реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

2. Экспериментальные воздействия в системе in vivo

Экзогенный Т4 вводился животным подкожно в суточных дозах 0,04 мг/кг, или 40 мг/кг. В качестве контроля использовались инъекции растворителя гормона [7] .

Изучение влияния гормона на отдельные этапы формирования этих иммунных реакций было проведено в нескольких сериях экспериментов.

Продолжительность введения Т4 в этих моделях варьировала от 5 до 10 дней.

При анализе действия гормона на антигеннезависимый этап формирования ответной реакции Т4 инъецировали в течение 5 дней до иммунизации, а на антигензависимый этап - в течение 5 дней после иммунизации.

Помимо оценки уровня АОК и реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у всех животных определяли количество ЯСК в периферической крови, селезенке, перитонеальной полости, регионарном (подколенном) лимфатическом узле, при параллельной оценке фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови и перитонеальной полости.[4]

То есть, у иммунизированных животных, Т4 угнетает способность к фагоцитозу нейтрофилов крови и дозозависимо стимулирует ее у перитонеальных макрофагов. Данный эффект зависит от дозы Т4 и от времени гормонального воздействия, но не от варианта иммунизации. В системе in vitro подавление нейтрофильного фагоцитоза крови ассоциировано с циклооксигинезом ( ЦОГ), а активация поглотительной активности перитонеальных макрофагов не связана с циклооксигинезом ( ЦОГ) и Са - каналами L-типа.

3. Изменение концентрации тироксина при введении гормона в течение различных этапов иммунного ответа

Известно, что процесс формирования иммунокомпетентных клеток включает в себя как антигеннезависимый, так и антигензависимый этапы .

На антигеннезависимом этапе преобладают наивные клетки, чувствительность которых к регуляторному воздействию отличается от антигенпримированных прекурсоров, трансформирующихся в эффекторные субпопуляции в период антигензависимой дифференцировки. Т4 в дозах 0,04 мг/кг или 40 мг/кг вводилось ежедневно, по определенным схемам с учетом этапов формирования иммунокомпетентных клеток. На протяжении антигеннезависимого и антигензависимого этапов иммуногенеза Т4 инъецировали 10 дней. На антигеннезависимом или антигензависимом этапе длительность введения гормона составила 5 дней [6] .

Вывод: При локальной иммунизации инъекции Т4 на протяжении любого этапа иммуногенеза стимулируют реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Максимальная выраженность модулирующего действия низкой дозы Т4 проявляется при ее введении на антигеннезависимом этапе, а высокой дозы гормона - на антигензависимом этапе.

4. Изменение уровня IgM-AOK, IgG-AOK селезенки, выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа и титра антител к ЭБ при экспериментальном гипертиреозе

Введение Т4 в условиях формирования вторичного иммунного ответа изменяло направленность его действия по сравнению с первичным иммунным ответом. Так, инъекции Т4 дозозависимо повышали численность IgG-AOK в селезенке, при этом не влияли на генерацию IgM-AOK, на 106 спленоцитов и численность ЯСК в органе. Одновременный анализ реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у этих же животных не выявил статистически значимых изменений в ее выраженности при инъецировании различных доз гормона. Проведенный корреляционный анализ между числом АОК в селезенке и выраженностью реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) не обнаружил достоверных взаимосвязей (р 0,05)[1]. Оценка клеточности регионарного лимфатического узла на стороне иммунизированной стопы в условиях введения низкой дозы Т4 показала увеличение количества ЯСК. Несмотря на повышение уровня IgG-AOK в селезенке, титр антител к нативным ЭБ в сыворотке крови относительно контрольной группы статистически значимо не изменялся, однако в сравнении между дозами Т4 были выявлены достоверные различия, а именно, в условиях введения высокой дозы гормона наблюдалось снижение титра антител к ЭБ. Оценка зависимостей между уровнем АОК в селезенке и титром антител к ЭБ в сыворотке крови не обнаружила статистически значимых изменений у экспериментальных животных [10] .

Введение Т4 при индукции первичного гуморального иммунного ответа внутрибрюшинной иммунизацией повышает число IgM-антителопродуцентов в селезенке вне зависимости от времени гормонального воздействия. Данный эффект максимально проявляется при введении низкой дозы Т4 на антигеннезависимом этапе, а высокой дозы гормона - на антигензависимом этапе иммуногенеза. При формировании вторичного системного иммунного ответа инъекции Т4 дозозависимо повышают численность IgG-, но не IgM-антителопродуцентов в селезенке.

5. Влияние Т4 на антителогенез в условиях его воздействия на различные этапы иммуногенеза

Введение Т4 не изменяло клеточность селезенки вне зависимости от его дозы. Корреляционный анализ между уровнем АОК в селезенке и титром антител к ЭБ не выявил статистически значимых изменений у гипертиреоидных животных. Напротив, введение Т4 (40 мг/кг) после внутрибрюшинной иммунизации стимулировало формирование АОК в селезенке, в то время как малая доза гормона не оказывала существенного влияния на их генерацию. Однако титр антител к ЭБ и клеточность селезенки дозозависимо повышались. Оценка данных зависимостей показала наличие прямой корреляции у животных, которым инъецировали Т4 в дозе 0,04 мг/кг между уровнем АОК в селезенке и титром антител к ЭБ (Rs=0,72; р 0,05), что предполагает гормонзависимое усиление белоксинтезирующей функции АОК [3] .

Заключение

По результатам работы выявлено, что инъекции гормона при формировании первичного иммунного ответа в условиях системной иммунизации усиливают процессы антителогенеза, а в случае локальной иммунизации, стимулируют реакцию гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). Эти эффекты Т4 дозозависимы и в низкой дозе проявляются при воздействии на антигеннезависимый этап иммуногенеза.

Действие высокой дозы Т4 преимущественно реализуется на антигензависимом этапе дифференцировки клеток и проявляется в активации клеточноопосредованных иммунных реакций.

Получены оригинальные данные по избирательности и разнонаправленности действия гормона на фагоцитоз лейкоцитов периферической крови и перитонеальных макрофагов на фоне формирования адаптивных иммунных реакций.

Обнаружено, что Т4 преимущественно угнетает поглотительную активность нейтрофилов крови и одновременно стимулирует ее для перитонеальных макрофагов.

Впервые в системе in vitro выявлены возможные механизмы действия Т4 на фагоцитоз интактных клеток крови и перитонеальной полости.

Установлено, что снижение нейтрофильного фагоцитоза под действием гормона может быть связано с активацией циклооксигинеза (ЦОГ), в то время как стимуляция поглотительной активности перитонеальных макрофагов Т4 не ассоциирована с Са-каналами L-типа и циклооксигинеза (ЦОГ), а опосредована другими сигнальными путями.

В теоретическом плане полученные данные расширяют представление о механизмах действия Т4 на реакции врожденного и адаптивного иммунитета.

Выявлена избирательность действия Т4 на поглотительную активность клеток разных отделов лимфомиелоидного комплекса на фоне формирования гуморальной и/или клеточной составляющей иммунного ответа.[8]

На основании полученных результатов среди них обнаружены основные тироксин-зависимые "мишени" иммунной системы, функции которых изменяются в условиях формирования системного и/или локального иммунного ответа. Определена направленность эффектов Т4 не только на поглотительную активность клеток периферической крови и перитонеальной полости, но и на 10 антителогенез и реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) в условиях воздействия на разные этапы реализации первичного и вторичного иммунного ответа.[9]

В практическом плане полученные данные следует учитывать при анализе функций иммунокомпетентных клеток в условиях гипертиреоза и при использовании препаратов Т4 в медицине.

Читайте также: