Осмотическая резистентность эритроцитов в норме. Биохимические исследования в гематологии

Обновлено: 05.05.2024

Синонимы: Анализ крови на осмотическую резистентность эритроцитов; Осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ); Осмотическая стойкость эритроцитов.

Osmotic fragility test (OFT); Osmotic fragility of red blood cells; Red blood cell osmotic fragility test.

Краткая характеристика теста на Осмотическую резистентность эритроцитов

Тест на осмотическую резистентность эритроцитов заключается в измерении их устойчивости к гемолизу при воздействии солевых растворов разной концентрации. Когда эритроциты попадают в гипотоническую среду, вода по осмотическому градиенту устремляется в клетки, что может приводить к разрушению и лизису (гемолизу) эритроцитов. Осмотическая устойчивость характеризует способность эритроцитов принимать воду без лизиса клетки, она зависит, в частности, от соотношения площади поверхности к объему клетки.

С какой целью исследуют Осмотическую резистентность эритроцитов

Оценка осмотической резистентности эритроцитов – классический тест, используемый в диагностике наследственного сфероцитоза. Наследственный сфероцитоз – гетерогенная группа наследственных гемолитических анемий, развивающихся вследствие генетических дефектов, которые приводят к дефекту или дисфункции белков мембраны и цитоскелета эритроцитов, в результате чего эритроциты приобретают характерную сферическую форму. Это приводят к ускоренному разрушению эритроцитов в селезенке и укорочению их срока жизни. Сфероциты являются осмотически менее стойкими клетками, которые легче лизируются в гипотоническом растворе, по сравнению с нормальными эритроцитами. Заболевание проявляется гемолитической анемией различной степени выраженности, спленомегалией, желтухой. В крови наблюдается обычно микроцитарная нормохромная анемия, ретикулоцитоз. Гемолитические кризы могут возникать при инфекциях или интоксикациях. Другим частным осложнением субклинического сфероцитоза является желчнокаменная болезнь, возникающая в раннем возрасте, которая может быть одним из показаний для обследования пациентов. Нормальная осмотическая резистентность эритроцитов не исключает диагноз наследственного сфероцитоза и может отмечаться у 10-20% таких пациентов, осмотическая стойкость может быть нормальной при сочетании с дефицитом железа, обтурационной желтухой, в фазе восстановления после апластического криза (когда увеличено число ретикулоцитов).

Напротив, повышенная осмотическая стойкость эритроцитов указывает на наличие сплющенных эритроцитов (лептоцитов), в таких клетках снижено соотношение площади поверхности к объему. Подобные изменения наблюдаются при железодефицитной анемии, талассемии и серповидноклеточной анемии, так как эритроциты с низким содержанием гемоглобина (эритроцитарный индекс MCH) и низким средним объемом клеток (эритроцитарный индекс MCV) необычайно устойчивы к осмотическому лизису.

Что может повлиять на результат оценки Осмотической резистентности эритроцитов

Осмотически более устойчивы ретикулоциты и эритроциты у пациентов после спленэктомии. При заболеваниях печени, вследствие пассивного накопления липидов, эритроциты также проявляют относительно большую резистентность к осмотическому лизису.

Правила подготовки к Определению осмотической резистентности эритроцитов

Специальной подготовки не требуется. Рекомендуется проводить взятие крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

В каких случаях проводят Определение осмотической резистентности эритроцитов:

дифференциальная диагностика гемолитических анемий;
подтверждение наследственного сфероцитоза;
желчнокаменная болезнь в раннем возрасте;
гиперспленизм и спленомегалия.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Осмотическая резистентность эритроцитов в норме. Биохимические исследования в гематологии

Тест на осмотическую резистентность эритроцитов - методика, показатели нормы

Принцип теста на осмотическую резистентность эритроцитов. При погружении эритроцитов в гипотонический раствор наблюдается сокращение отношения площадь/объем с последующим набуханием и расплавлением. Испытание заключается в фотоколориметринеском определении гемоглобина, выделяемого эритроцитами, погруженчыми в солевой раствор, гипотонические значения которого повышаются.

Материалы, реагенты для теста на осмотическую резистентность эритроцитов: пробирки на 10/100 мм; градуированные пипетки на 1 и 2 мл; штативы; флаконы на 100 мл; фотоколориметр; солевой раствор — запас: 18 г NaCl; 2,73г Na2HPО4; 0,374 г NaH2PО4; 200 мл дистилированной воды. Приготовленный таким образом раствор сохраняется месяцами в закупоренном пробкой флаконе.

Из запасного раствора приготовляются гипотонические растворы следующих концентраций: 0,9, 0,75, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,20, также 0,10% NaCl, в объемах 50 мл, которые сохраняются несколько недель при температуре +4°С. Гипотонический раствор приготовляется следующим образом: 13 флаконов на 100 мл помечаются цифрой желаемого получить разведения солевого раствора; из имеющегося в запасе раствора отбираем объем в 10 раз больше отмеченной на флаконе цифры (напр., в флакон, на котором отмечено 0,15% влить 1,5 мл), затем до 100 мл дополнить дистилированной водой.
Эритроциты извлекаются из гепаринизованной или дефибринированной свежеотобранной крови.

Техника теста на осмотическую резистентность эритроцитов. В чашу центрифуги влить по 10 мл из каждого раствора. В другую чашу, помеченную, «0» влить 10 мл дистилированной воды.

Нормальные значения гемолиза

Затем в каждую из чаш добавить по 0,1 мл осадка эритроцитов, прогомогенизировать содержимое опрокидыванием посуды и продержать 60 мин. в комнатной температуре. По истечении этого интервала взвесь процентрифугировать для выпадения нерасплавленных эритроцитов и клеточных остатков и отобрать надосадочную массу. В чаше, помеченной «0» гемолиз должен быть полным. Определить оптическую плотность надосадочной массы при 540 нм (или зеленом фильтре) соответственно каждой концентрации солевого раствора. Прочет сделать по сравнению с взвесью эритроцитов, находящихся в чаше с 0,9% NaCl.

Дополнительно определение осмотической резистентность можно провести и на предварительно подвергнутых инкубации эритроцитах, при 37°С. С этой целью 2 мл стерильно отобранной на гепарине крови влить в простерилизованную и закупоренную пробкой чашу центрифуги, вместимостью 10 мл и подвергнуть суточной инкубации, при температуре 37СС. Затем определить осмотическую хрупкость, как описано выше.

Расчет, толкование результатов теста на осмотическую резистентность эритроцитов. В процентном выражении гемолиз каждой чаши расчитывается по формуле: % гемолиза = ОП пробы/ОП в чаше «О» х 100.
Нормальные значения приведены в таблице выше.

Повышенная осмотическая резистентность встречается при наследственном сфероцитозе, когда она стойкая после инкубации, также при аутоиммунной гемолитической анемии.

Высокая устойчивость к расплавлению отмечается при гомо- и гетерозиготной талассемии, железодефицитной анемии, после иссечения селезенки, равно как и при иных обстоятельствах увеличения площади эритроцита.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Определение осмотической резистентности эритроцитов (Osmotic fragility (OF) test, RBC)

26-10-900. ОСМОТИЧЕСКАЯ СТОЙКОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ (АНЕМИИ)

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A12.05.002 "Исследование осмотической резистентности эритроцитов"

Биоматериал: Кровь ЭДТА

Срок выполнения (в лаборатории): 8 р.д. *

Описание

Под осмотической резистентностью эритроцитов понимается их устойчивость по отношению к гипотоническим растворам натрия хлорида. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида (в серии растворов с постепенно уменьшающейся концентрацией), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе в течение 3 ч; максимальная — минимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов крови, помещенных в этот раствор. Под минимальной осмотической резистентностью эритроцитов понимают максимальную концентрацию гипотонического раствора натрия хлорида, при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, которые находятся в растворе 3 часа. Под максимальной осмотической резистентостью эритроцитов понимают минимальную концентрацию гипотонического раствора хлорида натрия, вызывающего в течение 3 часов гемолиз всех эритроцитов, помещенных в раствор. Максимальная осмотическая резистентность ниже 0,32 % возможна после больших кровопотерь и спленэктомии, при гемоглобинозе С, застойных желтухах, а также в некоторых случаях полицитемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32 % характерно для талассемии и гемоглобинопатии. Минимальная осмотическая резистентность выше 0,48 % наблюдается при семейной гемолитической анемии, гемолитической анемии новорожденных и отравлении свинцом. Можно обнаружить небольшие изменения и при токсикозах, бронхопневмониях, туберкулезе, малярии, лейкемии, миелосклерозах, лимфогранулематозе, циррозе печени. Случаи расширения границ осмотической резистентности (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной Сниженная осмотическая стойкость эритроцитов в гипотонических растворах свидетельствует об структурных дефектах мембраны эритроцита, обусловленных генами мембранных белков. В отличии от сфероцитоза при гемоглобинопатиях (талласемии и S-гемоглобинопатии) возникает относительный избыток мембраны, что ведет к увеличению осмотической стойкости клеток для гипотонического лизиса, поэтому тест позволяет проводить дифф.диагноз между наиболее частыми причинами наследственных гемолитических анемий.

Показания к назначению

Поводом для обследования будет соответствующая клиническая картина. Специфических симптомов, которые будут характерны только отклонению от нормы резистентности нет. Может присутствовать симптоматика такого характера: бледность кожных покровов; снижение веса без видимой причины;повышенная утомляемость и нарастающая слабость, что будет больше похоже на синдром хронической усталости; плохой аппетит; сонливость; обострение хронических заболеваний. При наличии клинической картины нужно обращаться к врачу. Первоначально это врач общей практики, то есть терапевт. Далее обследованием занимаются гематолог и смежные специалисты. Если диагностически будет установлено, что показатели ниже или выше допустимых, в обязательном порядке нужно проходить лечение, так как большая часть этиологических факторов представляет опасность не только для здоровья, но и для жизни пациента.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Единицы измерения - %. Референсные значения: Осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,5 г/дл 3-53%, осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,6 г/дл (после инкубации при +37 ºC) 14-74% , осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,65 г/дл (после инкубации при +37 ºC) 4-40% , осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,75 г/дл (после инкубации при +37 ºC) 1-11%. Причины максимальной осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32%: массивные кровопотери; спленэктомия; гемоглобиноз С; застойная желтуха; некоторые случаи полицитемии; талассемия; гемоглобинопатия. Причины минимальной осмотической резистентности эритроцитов выше 0,48%: семейная гемолитическая анемия; гемолитическая анемия новорожденных; отравление свинцом. Расширение границ осмотической резистентности эритроцитов наблюдается в начале острого гемолитического криза, в остром периоде пернициозной анемии.

Читайте также: