Иммуноэлектрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
Обновлено: 24.04.2024
Электрофорез и иммунофиксация пентавалентной антисывороткой с оценкой содержания М-компонента с помощью денситометрии.
M-gradient, screening; Serum electrophoresis and immunofixation with multivalent antiserum and quantification of M-gradient; M-Gradient, Screening. Serum Protein Electrophoresis (SPEP), Immunofixation with Polyvalent Antiserum, Quantification of M-Protein (without Typing).
Краткое описание исследования «М-градиент, скрининг. Электрофорез сыворотки и иммунофиксация с поливалентной антисывороткой и количественной оценкой М-градиента»
Иммуноглобулины – белки, обладающие активностью антител (способностью специфично связывать определенные антигены). В отличие от большинства белков сыворотки крови, которые вырабатываются в печени, иммуноглобулины продуцируются плазматическими клетками – потомками стволовых клеток-предшественниц В-лимфоцитов в костном мозге. По структурным и функциональным различиям выделяют пять классов иммуноглобулинов – IgG, IgA, IgM, IgD, IgE и ряд субклассов. Поликлональное увеличение количества иммуноглобулинов – нормальный ответ на инфекции.
Моноклональные гамммапатии – состояния, когда клоном плазматических клеток или В-лимфоцитов (популяцией клеток, берущих начало от одной В-клетки-предшественницы) продуцируется аномально большое количество однородного иммуноглобулина. Такие состояния могут быть доброкачественными (когда нет тенденции к неконтролируемому росту популяции таких клеток и увеличению продукции соответствующего моноклонального белка) или злокачественными (когда популяция клеток склонна к постоянному неконтролируемому росту и, как следствие, повышению концентрации соответствующего моноклонального белка и развитию патологии разных органов и систем организма). Моноклональные гаммапатии выявляют по появлению аномальной полосы белка при электрофорезе сыворотки или мочи (М-белок).
Молекулы иммуноглобулинов состоят из одной или более структурных единиц, построенных по единому принципу − из двух идентичных тяжелых цепей (различающихся для IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) и двух идентичных легких пептидных цепей – каппа или лямбда. Разновидности тяжелых цепей являются основой деления иммуноглобулинов на классы. Цепи иммуноглобулинов имеют константные и вариабельные участки, последние связаны с антигенной специфичностью.
Иммуноглобулин, продуцируемый одним клоном клеток, имеет идентичную структуру, представляет один класс, подкласс, характеризуется идентичным составом тяжелых и легких цепей. Поэтому если в сыворотке присутствует аномально большое количество моноклонального иммуноглобулина, в процессе электрофоретического разделения белков сыворотки крови он мигрирует в виде компактной полосы, которая выделяется на фоне стандартной картины распределения белковых фракций сыворотки. При описании результатов электрофореза белков сыворотки его называют также парапротеином, М-пиком, М-компонентом, М-белком или М-градиентом. По структуре такой моноклональный иммуноглобулин может быть полимером, мономером или фрагментом молекулы иммуноглобулина (в случае фрагментов чаще это легкие цепи, реже – тяжелые).
Выявление моноклональных парапротеинов проводится методом электрофореза белков. Иногда фибриноген и СРБ, мигрирующие при электрофорезе в гамма- или бета-фракциях, могут быть ошибочно расценены как парапротеины. Иммуноглобулиновую природу выявленного моноклонального компонента подтверждают с помощью иммунофиксации разделенных белков специфической поливалентной преципитирующей антисывороткой, направленной против иммуноглобулинов (см. тест № 4050). При подтверждении присутствия моноклонального иммуноглобулина проводится денситометрия и определяется его количественное содержание. Для полноценной идентификации (типирования) моноклонального компонента требуется развернутое исследование с помощью электрофореза и иммунофиксации с развернутой панелью антисывороток против IgG, IgA, IgM, каппа и лямбда цепей (см. тест № 4051 ). В диагностике и прогнозе учитывают класс выявленного парапротеина, его концентрацию в момент установления диагноза, скорость повышения его концентрации в динамике. Наличие парапротеина является маркером ряда гематоонкологических заболеваний.
Множественная миелома – классическое гематологическое заболевание, обусловленное злокачественной пролиферацией плазмоцитов, секретирующих моноклональный иммуноглобулин (парапротеин) или его фрагменты. Плазматические клетки чаще пролиферируют диффузно в костном мозге, заболевание приводит к остеолитическим поражениям костей, редукции других клеток костного мозга, что ведет к анемии, тромбоцитопении, лейкопении, ингибирует развитие нормальных клонов плазматических клеток. Пациенты могут обращаться с локальными симптомами патологии костей (боли, переломы) или неспецифичными симптомами (потеря массы тела, анемия, кровотечения, повторные инфекции или почечная недостаточность). У большинства больных на момент установления диагноза концентрация парапротеина превышает 25 г/л. При миеломе парапротеин в сыворотке крови чаще всего представлен IgG (60%), реже IgA (20%) и около 20% приходятся на миелому Бенс-Джонса, связанную с продукцией свободных легких цепей каппа или лямбда (20%), которые могут быть обнаружены в моче. Иногда при миеломе может встречаться биклональный парапротеин, представленный иммуноглобулинами разных классов или одного класса, но содержащий легкие цепи разных классов. Редко отмечается IgD и IgE миелома. Определение концентрации парапротеина используют для контроля эффективности лечения миеломы, такой мониторинг при миеломе на фоне терапии должен осуществляться каждые три месяца. Если содержание парапротеина снизилось ниже детектируемого, повторное измерение целесообразно проводить через шесть или двенадцать месяцев.
Макроглобулинемия Вальденстрема представляет собой лимфому с гиперпродукцией моноклонального IgM. Лимфоплазмацитарные опухолевые клетки с характерным иммунофенотипом диффузно распределены в лимфатических узлах, селезенке и костном мозге. Высокая концентрация моноклонального IgM часто превышает 30 г/л и приводит к увеличению вязкости крови и ряду клинических проявлений, включающих спутанность сознания, слепоту, склонность к кровоточивости, сердечную недостаточность и гипертензию. При макроглобулинемии часто отмечается парапротеинемическая полинейропатия, холодовая гемолитическая анемия и криоглобулины. При других разновидностях лимфом и хроническом лимфолейкозе парапротеины класса IgM отмечается у 20% больных, однако концентрация парапротеина обычно ниже 30 г/л.
Болезнь тяжелых цепей (болезнь Франклина) сопровождается синтезом только тяжелой цепи IgG-гамма, без сопутствующей легкой цепи. Это крайне редкое заболевание проявляется отеком мягкого неба и лимфоидной инфильтрацией. Также редко отмечается болезнь тяжелых цепей альфа, при которой возникает хроническая диарея, нарушение всасывания, обусловленные лимфоидной инфильтрацией стенки кишки.
Моноклональный парапротеин может быть обнаружен при ряде неопухолевых заболеваний, в частности, при эссенциальной криоглобулинемии (чаще IgM), парапротеинемической хронической полинейропатии, холодовой гемолитической анемии, АL-амилоидозе почек (свободные цепи лямбда) и внутренних органов, болезни отложения легких цепей. Парапротеин в сыворотке крови отмечается также при болезни Кастелмана (IgM-лямбда), POEMS-синдроме (полинейропатия с органной мегалией) и микседематозном лишае (IgG-каппа).
Что может повлиять на результат теста «М-градиент, скрининг. Электрофорез сыворотки и иммунофиксация с поливалентной антисывороткой и количественной оценкой М-градиента»
При скрининговых обследованиях частота выявления парапротеинемии резко увеличивается в популяции после достижения 50 лет и достигает 4-10% у лиц старше 65 лет. Однако большинство впервые выявленных парапротеинемий в общей популяции представляют собой бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ). Концентрация парапротеина при МГНЗ существенно ниже 30 г/л и обычно не превышает 10-15 г/л. Кроме того, при МГНЗ парапротеин выявляется на фоне поликлональных иммуноглобулинов, т. е. угнетения нормального синтеза других иммуноглобулинов не происходит. Термин «МГНЗ» указывает на случаи парапротеинемии без других признаков онкогематологического заболевания, которые требуют ежегодного мониторинга, чтобы не пропустить момента озлокачествления процесса. При выявлении парапротеинов у обследованных моложе 50 лет необходимы еще более частые повторные обследования, поскольку у них отмечается высокий риск развития множественной миеломы. Если концентрация М-белка составляет более 15 г/л, вне зависимости от возраста рекомендуется проводить расширенное обследование, включающее электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксацию каждые 3-6 месяцев, поскольку риск злокачественной трансформации очень высок. Выделяют доброкачественную парапротеинемию, которая характеризуется сохранением парапротеина без прогрессирования во множественную миелому или другое заболевание в течение пяти лет наблюдения. При транзиторной парапротеинемии концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.
С какой целью проводят исследование «М-градиент, скрининг. Электрофорез сыворотки и иммунофиксация с поливалентной антисывороткой и количественной оценкой М-градиента в крови»
Электрофорез белков сыворотки крови и иммунофиксацию поливалентной антисывороткой для подтверждения наличия и количественной оценки М-белка используют в диагностике миелом.
Иммуноэлектрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
Иммунофиксация плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
Иммунохимически идентифицировать белки на электрофореграмме без потери наглядности и четкости классической электрофоретической картины позволяет метод иммунофиксации (ИФ).
При выполнении иммунофиксации на одной и той же пластине с агарозным гелем проводят несколько электрофоретических разделений исследуемого образца, после чего один из треков окрашивают сразу после окончания фореза (он служит контролем), а на поверхность остальных наносят антисыворотки определенной специфичности.
В месте расположения белка, прореагировавшего с родственной ему антисывороткой, через некоторое время (обычно в пределах часа) образуется преципитат, который полностью сохраняет форму и положение изучаемой фракции. Предварительно отмыв несвязавшиеся белки солевым раствором, пластины окрашивают. Зону миграции белка уточняют, соотнося положение преципитата, образованного этим белком, с контрольной фореграммой.
Иммунофиксацию широко используют в диагностике моноклональной секреции. К наиболее типичным ситуациям относятся:
1) иммунохимическая идентификация небольших М-градиентов, особенно при нормальном содержании поликлональных иммуноглобулинов;
2) выявление и идентификация скрытых М-градиентов, когда моноклональный белок мигрирует в зоне а- или b-глобулинов и маскируется нормальными белками этих фракций, особенно при низком уровне продукции.
В ряде случаев иммунофиксация позволяет распознать так называемые ложные М-градиенты — электрофоретически гомогенные полосы, напоминающие М-градиент, но не относящиеся к иммуноглобулинам. Отсутствие специфического преципитата в зоне такой полосы при реакции с антисыворотками к Н- и L-цепям иммуноглобулинов позволяет отвергнуть предположение о наличии парапротеина в исследуемом образце.
Выявление и характеристика М-градиента в сыворотке крови методом иммунофиксации в геле агарозы.
При проявлении электрофореграмм антисыворотками к а- и к-цепям иммуноглобулинов в b2-зоне выявлен М-градиент, образованный парапротеином Ак (указан стрелкой).
Иммунофиксация является методом выбора при анализе множественной секреции, если в образце присутствуют два и более М-градиентов.
Помимо высокой специфичности и разрешающей способности, достоинством метода является также его высокая чувствительность. Это объясняется двумя факторами: накоплением белка (антител) в зоне градиента при образовании специфического преципитата и минимальной диффузией антигена при реакции с антисывороткой. При иммунофиксации можно выявить следовые М-градиенты, которые не видны на окрашенной электрофореграмме.
Основная методическая трудность — подбор адекватного разведения образца для получения плотного, хорошо видимого преципитата. Если образец разведен недостаточно, то преципитат может раствориться в избытке антигена (исследуемый белок). При слишком большом разведении образца образовавшийся преципитат можно не увидеть. В обоих случаях имеет место ложноотрицательный результат.
В последние годы благодаря исключительно высокой информативности метода и появлению коммерческих диагностических наборов, укомплектованных высокоаффинными антисыворотками (что приводит к получению стабильных результатов), иммунофиксация в большинстве диагностических ситуаций оттеснила на второй план традиционный иммуноэлектрофорез (ИЭФ).
Чувствительность иммунофиксации можно значительно повысить, если использовать для разделения белков противоточный изотахофорез (ИТФ) на ацетат-целлюлозной мембране, предложенной Г. И. Абелевым и соавт.. Это метод электрофореза в неоднородной системе буферов, имеющих общий катион, но разные анионы.
При изотахофорезе (ИТФ) ионы разделяемого образца располагаются в порядке уменьшающейся электрофоретической подвижности между двумя видами анионов буфера: «ведущим» (с более высокой подвижностью) и «замыкающим» (с меньшей подвижностью). Изотахофорез (ИТФ) позволяет одновременно с разделением концентрировать в 10—100 раз белки, находящиеся в высокоразбавленных растворах.
В связи с этим метод хорошо подходит для выявления и индентификации белка Бенс-Джонса в моче, а также для исследования малобелковых биологических жидкостей, доступных в небольшом объеме, ограничивающем предварительное концентрирование (церебральная и слезная жидкости, слюна и т. д.).
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Методика иммунохимического исследования парапротеинов - принципы
Иммунохимическое исследование, проводимое при подозрении на наличие моноклональной секреции, представляет собой комплексный анализ, состоящий из двух этапов.
На этапе скрининга проводят электрофоретическое исследование сыворотки и концентрированной мочи, а также определяют количество иммуноглобулинов основных трех классов (G, А, М) и соотношение к/h. В типичных случаях, которые характеризуются высоким уровнем моноклональной секреции (особенно IgG и IgA) и снижением содержания по-ликлональных иммуноглобулинов, такого объема исследований достаточно для выявления и характеристики парапротеина.
Если уровень секреции невысок или по результатам скрининг-тестов не все ясно, то с учетом данных, полученных на первом этапе, планируют продолжение исследования с применением других методов, прежде всего ИФ и ИЭФ.
Выявление М-градиента — ключевой момент при диагностике моноклональной секреции, поэтому для проведения электрофореза должен быть выбран вариант с высокой чувствительностью и хорошим разрешением. Этим требованиям отвечает электрофорез в геле агарозы. Трудности при выявлении М-градиента могут быть связаны с несколькими моментами.
Прежде всего при низком содержании парапротеина М-градиент может быть не виден или слегка заметен на электрофореграмме. Кроме того, часть М-градиентов, особенно образованных белками Бенс-Джонса и А-парапротеинами, мигрирует в зоне а- и р-глобулинов и может маскироваться нормальными белками этих зон. В ряде случаев на электрофореграмме выявляются так называемые ложные М-градиенты, образование которых связано с высоким содержанием белков неиммуноглобулиновой природы.
Например, С-реактивный белок может давать небольшую гомогенную полосу в центре у-зоны. Лизоцим обусловливает образование небольшого градиента в зоне медленных у-глобулинов, что встречается при хроническом моноцитарном лейкозе. Полоса фибриногена при исследовании плазмы или при нарушениях свертывания крови может имитировать М-градиент в у1-зоне. Резкое повышение уровня а2-макроглобулина может быть ошибочно принято за М-градиент в а2-зоне. Наконец, наличие свободного гемоглобина в гемолизированном образце ведет к появлению интенсивной полосы в зоне b1-глобулинов.
Дополнительную полосу в зоне b-глобулинов дают также генетические варианты трансферрина. Большое количество крупных иммунных комплексов и наличие криоглобулинов вызывают образование нерастворимого осадка в области стартовой лунки, что также может быть ошибочно расценено как М-градиент. Во всех этих ситуациях используют иммунохимические методы, чаще всего иммунофорез, которая в большинстве случаев позволяет прояснить картину.
При подозрении на моноклональную секрецию обязательно электрофоретическое исследование концентрированной мочи, даже если общепринятыми биохимическими методами протеинурия не выявлена. Дело в том, что при выявлении протеинурии из-за низкой чувствительности биохимических реакций не всегда удается обнаружить белок Бенс-Джонса. Термопреципитация в кислой среде, которая считается качественной пробой на присутствие этого белка, также малочувствительна и неспецифична, поэтому результаты часто бывают ложными.
Электрофорез концентрированной мочи, сопровождаемый в случае необходимости иммунохимическим исследованием, обладает наибольшей чувствительностью и специфичностью при выявлении парапротеинурии и, кроме того, позволяет охарактеризовать тип протеинурии.
При клинических проявлениях криоглобулинемии необходимо сразу после взятия крови поместить пробирку в термостат при температуре 37 С и инкубировать до полного образования сгустка, иначе криоглобулин, в состав которого может входить моноклональный белок, будет утерян. Криоглобулины, имеющие клиническое значение, образуют преципитат при температуре 4 °С уже через 12—24 ч. Если криопреципитат появляется через 4—7 дней, то клинические проявления маловероятны.
Определенной проблемой является измерение уровня парапротеина в сыворотке крови и моче. В настоящее время оптимальным методом считается денситометрия фореграмм, поскольку прибор дает возможность выделить пик, соответствующий М-градиенту, и рассчитать содержание в нем белка. Нефелометрия также может быть использована для определения уровня парапротеина. Однако следует помнить, что этот метод позволяет установить только суммарное количество парапротеина и поликлональных иммуноглобулинов того же класса, поэтому при успешной терапии, когда количество парапротеина снижается, а уровень поликлональной секреции повышается, данные нефелометрического исследования относительно изменения уровня парапротеина менее достоверны, чем результаты денситометрии.
При повторных обследованиях одного и того же больного не следует менять метод определения.
Радиальная иммунодиффузия в связи с особенностями, подробно рассмотренными ранее, не рекомендуется для определения уровня парапротеинов.
Направление и глубина диагностического поиска при иммунохимической диагностике в немалой мере обусловливаются особенностями клинической картины и данными предварительного лабораторного исследования. В связи с этим в направлении на иммунохимическое исследование необходимо указывать те изменения, по поводу которых данное исследование предпринимается.
Классический иммуноэлектрофорез по Грабарю — один из наиболее ранних методов, использовавшихся для иммунохимической идентификации компонентов белковых смесей, в частности биологических жидкостей. Он включает в себя 2 этапа.
Сначала проводят электрофорез исследуемого образца в геле агара (или агарозы), затем вдоль оси электрофорез, по бокам полосы и на всем ее протяжении в геле вырезают траншеи, в которые вносят антисыворотки различной специфичности. Во время инкубации, которая занимает около 18 ч, происходит встречная диффузия антигенов (исследуемые белки) и антител с образованием линий преципитации, каждая из которых соответствует одной системе антиген — антитело.
По расположению линий, их форме, интенсивности можно судить о качественных особенностях исследуемых белков и в некоторой степени об их количестве. Используя моноспецифические сыворотки, можно исследовать свойства отдельных компонентов белковых смесей, например сыворотки.
До недавнего времени иммуноэлектрофорез широко применяли для выявления и идентификации парапротеинов, но сейчас в большинстве ситуаций используют метод иммунофореза, которая значительно превосходит иммуноэлектрофорез по чувствительности и наглядности получаемых результатов.
Образование линий преципитации при иммуноэлектрофорезе.
А — альбумин; а,, а2, b и у — глобулины разной подвижности.
Относительно низкая чувствительность иммуноэлектрофореза связана с воздействием характера диффузии исследуемых компонентов на результирующую картину, а также с маскирующим воздействием антигенно родственных белков (например, поликлональных иммуноглобулинов и их фрагментов, других парапротеинов при множественных градиентах), присутствующих в образце.
При массивной моноклональной секреции, особенно с сопутствующим иммунодефицитом, иммуноэлектрофорез вполне подходит для анализа патологических белков. Кроме того, иммуноэлектрофорез является методом выбора при диагностике БТЦ, поскольку условия формирования преципитата в иммуноэлектрофорезе таковы, что позволяют выявить структурно дефектные белки БТЦ на фоне антигенно родственных, но полноценных в структурном отношении поликлональных иммуноглобулинов того же класса.
Один из вариантов классического иммуноэлектрофореза — метод иммуноселекции. Он отличается от иммуноэлектрофореза тем, что электрофоретическое разделение белков проводят в геле, уже содержащем определенную моноспецифическую антисыворотку. При таком разделении белки соответствующей антигенной структуры избирательно осаждаются, образуя характерный преципитат по оси электрофореза, тогда как остальные белки свободно диффундируют в геле и на следующем этапе реакции выявляются другими моноспецифическими антисыворотками, вносимыми в борозды, как и в классическом варианте иммуноэлектрофорез.
Этот метод очень удобен, например, для выявления незначительной секреции белков БТЦ, когда при обычном иммуноэлектрофорезе картина неубедительна.
Электрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
Разделение растворенных белков под действием постоянного электрического поля носит название белкового электрофореза (ЭФ). В качестве носителя для проведения электрофореза могут быть использованы различные материалы, выбор которых зависит от поставленной задачи.
В настоящее время в диагностической практике в качестве поддерживающей среды используют ацетатцеллюлозную мембрану или гель агарозы (агароза отличается большей чувствительностью и лучшим разрешением, поэтому предпочтительна). Величина пор обоих этих носителей намного больше величины исследуемых молекул, в связи с чем даже высокомолекулярные белки мигрируют в них беспрепятственно.
В щелочной среде (именно в щелочном буфере проводят диагностический электрофорез) белки биологических жидкостей имеют суммарный отрицательный заряд. Под действием электрического поля они перемещаются к аноду со скоростью, зависящей главным образом от величины заряда. После окончания фореза пластину с разделенными образцами окрашивают специальными красителями, а затем полученные электрофореграм-мы оценивают визуально и с помощью приборов.
При использовании современного оборудования и готовых диагностических наборов получение электрофореграмм занимает обычно не больше 1 ч.
Электрофоретическое разделение нормальной сыворотки человека в геле агарозы позволяет выявить следующие фракции: преальбумин, альбумин и пять глобулиновых зон: а, (формируется в основном за счет а1-антитрипсина), а2 (ее образуют гаптоглобин и а2-макроглобулин), b1 (трансферрин), b2 (С3-компонент комплемента) и у (ее формирует в основном IgG). Если исследуют плазму, в быстрой у-зоне имеется дополнительно полоса фибриногена. Другие белки в норме содержатся в количествах, не позволяющих выявить их в виде отдельных зон, но при повышении их уровня могут давать дополнительные полосы в зоне своей миграции или приводить к усилению окраски уже существующих фракций. Это прежде всего орозомукоид и а-липопротеины (а,-зона), антихимотрипсин и церулоплазмин (а2-зона), фибронектин (граница а2- и b-зон), четвертый компонент комплемента — С4 (b-зона), С-реактивный белок и лизоцим (у-зона), поликлональные IgA (b2у1-зона) и IgM (у1-зона).
Электрофоретическое разделение плазмы здорового взрослого в геле агарозы.
1 — преальбумин; 2 — антихимотрипсин; 3 — церулоплазмин; 4 — фибронектин; 5 — С4 (4-й компонент комплемента); 6 — старт; 7 — С-реактивный белок; 8 — лизоцим; Альб. — альбумин; a1-Лп — а1-липопротеин; а1-Ат — а1,-антитрипсин; Ор— орозомукоид; a2-М — а2-макроглобулин; Гг2„, — гаптоглобин 2—2; р-Лп — р-липопротеин; Тф — трансферрин; Гп — гемо-пексин; C3 — 3-й компонент комплемента; Фб — фибриноген. Анод слева.
Поликлональные иммуноглобулины, характерной особенностью которых является гетерогенность структуры и, следовательно, заряда молекул, отличаются разной подвижностью в электрическом поле, поэтому область их миграции (у-зона) представляет собой широкое диффузное пятно без четких границ. Структурная гомогенность моноклональных иммуноглобулинов обусловливает гомогенность изоэлектрических точек молекул внутри пула. На электрофореграмме моноклональные иммуноглобулины образуют, как правило, узкую, четко ограниченную полосу, называемую М-градиентом.
Интенсивность окрашивания каждой из электрофоретических фракций пропорциональна количеству образовавшего ее белка: чем больше белковых молекул мигрирует в определенной зоне, тем больше красителя они связывают. Плотность окрашивания в каждой точке электрофореграммы оценивают с помощью специального прибора — денситометра, детектор которого регистрирует степень ослабления светового луча, перемещающегося вдоль трека перпендикулярно к поверхности последнего. Данные сканирования представляют в виде графика, на котором каждая белковая зона образует пик.
Высота пика отражает интенсивность окраски зоны, а ширина—степень ее гетерогенности. По площади пиков автоматически рассчитывают относительное (в процентах) и абсолютное (в весовых единицах) содержание белка в электрофоретических фракциях. Для расчета в весовых единицах необходимо предварительно ввести в прибор данные о концентрации общего белка в образце.
Качественно выполненный электрофорез является высокоинформативным методом. Он позволяет без больших затрат времени, сил и средств дать предварительную характеристику белков сыворотки и других биологических жидкостей.
Один из основных недостатков метода — неспецифичность, т. е. невозможность во многих случаях сделать вывод о природе белковой полосы, выявленной на электрофореграмме. Это относится прежде всего к дополнительным зонам и фракциям, отсутствующим в нормальной сыворотке. Кроме того, если электрофоретическая подвижность двух разных белков совпадает, то на электрофореграмме они образуют одну полосу. Поэтому в случаях, когда на основании клинико-лабораторного симптомокомплекса можно предполагать заболевание, характеризующееся белковой патологией, электрофоретическое исследование сыворотки недостаточно: необходимо использовать дополнительно иммунохимические методы.
Например, при дефиците IgA и IgM уровень электрофоретической у-фракции остается в пределах нормы, поскольку эта зона формируется в основном за счет IgG. Только иммунохимическое определение уровня иммуноглобулинов позволяет выявить иммунодефицитное состояние.
Читайте также: